G2991   HaloTag Mammalian Protein Purification System   品牌 Promega

HaloTag Mammalian Protein Purification System

货号: G2991      产品名称: HaloTag Mammalian Protein Purification System   品牌: Promega 规格: 30ul 二周到货 生化试验

说明  
 HaloTag® Technology (HaloTag® 技术) 是能在体内和体外实现共价标记和固定蛋白的一种技术平台。该技术是以独特设计的报告蛋白与其特异配基之间形成高效的共价键为基础,帮助研究者在生化和细胞环境中研究蛋白的功能。报告蛋白由HaloTag® 载体编码,这种共价结合可以发生在活细胞内、溶液内,或在固相支持物上。关于HaloTag® Protein Purification Systems 的更多信息,请访问HaloTag® Protein Purification Systems 的在线目录页面。
用于细胞成像的HaloTag® 荧光配基
( 关于HaloTag® 荧光配基的更多信息,请查看HaloTag ®技术:聚焦成像技术手册#TM260)
• 可穿透细胞的荧光配基 ( 快速标记操作方法):
HaloTag® TMR Ligand (555Ex/585Em), Cat.# G8251。
HaloTag® Oregon Green® Ligand (496Ex/516Em), Cat.# G2801。
HaloTag® diAcFAM Ligand (494Ex/526Em), Cat.# G8272。
HaloTag® Coumarin Ligand (353Ex/434Em), Cat.# G8581。
• 用于细胞表面标记的不可穿透细胞的荧光配基 ( 快速标记操作方法):
HaloTag® Alexa Fluor® 488 Ligand (494Ex/517Em),Cat.# G1001。
HaloTag® Alexa Fluor® 660 Ligand (663 Ex /690 Em ),Cat.# G8471,G8472。
• 可穿透细胞的荧光配基(“无冲洗”操作方法):
HaloTag® TMRDirect™ Ligand (555Ex/585Em), Cat.# G2991。
HaloTag® R110Direct™ Ligand (502Ex/527Em), Cat.# G3221。
用于蛋白检测的HaloTag® 配基
HaloTag® Biotin Ligand (HaloTag® 生物素配基,Cat.# G8281)含有12 个原子的生物素连接臂,由于生物素- 链霉亲和素具有高亲和力,可作为亲和标签用于捕获HaloTag® 蛋白。HaloTag® PEG-Biotin Ligand (HaloTag® PEG- 生物素配基,Cat.# G8591) 含有HaloTag® 生物素配基中所缺少的间隔基团,这为链霉亲和素和HaloTag® 蛋白之间提供了更长、更灵活的连接部位,从而在将HaloTag® 融合伴侣蛋白进行固定和衍生化的时候,有助于保护其活性。
关于HaloLink™ Protein Array Systems 的更多信息,请访问HaloLink™ Protein Array Systems 的在线目录页面。
关于HaloCHIP™ System 的更多信息,请访问HaloCHIP™ System 的在线目录页面。
HaloTag® 载体
HaloTag® 载体包含大小为33kDa 的单体HaloTag® 蛋白的开放阅读框(ORF),是一种水解酶基因的基因工程衍生物。对于哺乳动物细胞来说,HaloTag® 蛋白无内源性表达,使得其标记具有高特异性。
HaloTag® Flexi® 载体
有多种适用于哺乳动物、大肠杆菌和无细胞蛋白表达的HaloTag® Flexi 载体可供选择,并且与Flexi® 载体系统兼容。因此,可轻易地将编码蛋白的序列转入到Flexi® 载体中,Flexi® 载体含有多种表达标签或肽标签以满足下游应用。
用于哺乳动物蛋白表达的HaloTag ® Flexi ® 载体:
pFC14、pFC15、pFC16 和pFC17 HaloTag® CMV Flexi® 载体主要用于在哺乳动物细胞中表达C 末端HaloTag® 融合蛋白。
用于大肠杆菌蛋白表达的HaloTag ® Flexi ® 载体
pFN18 HaloTag® T7 Flexi® 载体主要用于在大肠杆菌中表达N末端HaloTag® 融合蛋白。
用于无细胞蛋白表达的HaloTag ® Flexi ® 载体:
pFN19 HaloTag® T7 SP6 Flexi® 载体主要用于在无细胞翻译系统中表达N 末端HaloTag® 融合蛋白。pFC20 HaloTag®T7 SP6 Flexi® 载体主要用于在无细胞翻译系统中表达C 末端HaloTag® 融合蛋白。
关于HaloTag® Flexi 载体的更多信息,请访问HaloTag® Flexi载体在线目录页面。
注意:pHT2 载体(Cat.# G8241) 已停产,不适合细菌系统的蛋白表达。
HaloTag® Flexi® 载体中的HaloTag® 蛋白与已停产的pHT2 载体中的HaloTag® 蛋白的差异比较
HaloTag® Flexi® 载体中的HaloTag® 蛋白是HaloTag® 7,
HaloTag® 7 在温度和变性剂方面具有更强的稳定性、更快的标记速度,因而与pHT2 HaloTag® 载体所含的HaloTag® 2 蛋白相比,蛋白表达得到了显著的改善。
HaloTag® 克隆启动系统
HaloTag® 克隆启动系统包括C8641,Flexi® System,Entry/Transfer;A9280, Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System;R1901,
Carboxy Flexi® Enzyme Blend;以及G3780, HaloTag® Flexi® Vectors-CMV Deletion Series Sample Pack。
关于HaloTag® Ligand Building Blocks 的

G4491   HaloTag Standard Protein   品牌 Promega

HaloTag Standard Protein

货号: G4491      产品名称: HaloTag Standard Protein   品牌: Promega 规格: 30μg 二周到货 生化试验

说明  
 蛋白阵列能够平行分析多组蛋白: 蛋白、蛋白: 药物或者蛋白:核酸之间的相互作用。HaloLink™ Protein Array Systems(HaloLink™蛋白阵列系统) 提供了一种新的创建自制( 按用户需求) 蛋白阵列的方法,该方法是创新的HaloTag® 技术、表面材料工程以及无细胞蛋白表达系统等优势的结合。
HaloTag® 蛋白是一个突变的水解酶,能够与HaloTag® 配基形成共价结合。在生理条件下,该结合反应快速、特异性高,得到的复合物在苛刻条件下依然能够保持稳定。使用HaloLink™ 蛋白阵列系统时,在无细胞表达系统中表达出HaloTag® 蛋白,然后在水凝胶包被的玻片上被共价捕获,该玻片连接着HaloTag® 配基。在无细胞表达系统中产生的融合蛋白无需预先纯化,可以直接用于蛋白捕获。使用这种方法可以在玻片表面同时快速合成和固定多个融合蛋白。在不到8 小时内,可以完成包括表达蛋白、制定蛋白阵列布局和分析蛋白相互作用在内的一整套实验。
HaloLink™ Array Six Slide System(HaloLinkTM 阵列六玻片系统) 内含HaloLink™ 玻片、HaloLink™ 密封垫和抗HaloTag® 抗体。欲使用六玻片系统,您需要自己准备蛋白表达系统或者订购TNT®T7 Quick Coupled Transcription/Translation System (Cat.# L1170或 L1171) 或TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System (Cat.# L3260 或 L3261)。六玻片系统中不包含HaloTag®Standard Protein (HaloTag® 标准蛋白,Cat.# G4491),但可以单独购买。
HaloTag® 技术提供了一种快速和简便的方法,通过荧光HaloTag® TMR 配基标记加上SDS-PAGE 分析来检测HaloTag® 融合蛋白的表达。HaloLink™ Protein Array 技术手册(TM310) 中有操作指南。
特点   . 快速生产蛋白:无细胞表达系统可以在单管中用偶联的转录/ 翻译方式快速生产目的蛋白,用于蛋白阵列实验。
• 蛋白捕获是不可逆的:使用其它亲和标签进行捕获的蛋白易于从结合物的表面脱离下来,本方法与此不同,HaloTag® 融合蛋白与HaloLink™ 玻片是共价结合的。
• 无需蛋白纯化步骤:目的蛋白直接从无细胞表达反应体系中被捕获。
• 非特异结合减少:HaloLink™ 玻片具有独特的水凝胶包被,此设计可以防止非特异结合,同时保护特异结合的蛋白的功能。
• 可耐受反复冲洗:HaloTag® 融合蛋白和HaloLink™ 玻片的共价结合可耐受反复而严格的冲洗,这能减少背景和降低假阳性率。
• 无需机械手:每个阵列为50 个点,可手工完成多个相互作用的同时研究,无需复杂的机械手。

 
 

G6270   HaloTag Protein Purification System Sample Pack   品牌 Promega

HaloTag Protein Purification System Sample Pack

货号: G6270      产品名称: HaloTag Protein Purification System Sample Pack   品牌: Promega 规格: 1 each 二周到货 生化试验

说明  
 HaloTag® Protein Purification System (HaloTag®蛋白纯化系统)被设计用于纯化HaloTag® 融合蛋白,HaloTag® 是一种新型蛋白标签,能够增强重组蛋白的表达产率和可溶性。HaloTag® 技术能够将目的蛋白以共价结合的形式、高效并特异地捕获到HaloLink™ 树脂上,因此克服了其它使用亲和标签进行蛋白纯化的方法所带来的、基于平衡反应的限制因素( 例如,低水平表达蛋白的低效捕获和冲洗纯化树脂导致的蛋白流失)。
可利用HaloTag® 技术快速、方便地检测HaloTag® 融合蛋白,也可监测HaloLink™ 树脂对蛋白的固定化效率,这是通过使用HaloTag® TMR 荧光配基进行标记,然后再进行SDS-PAGE 而实现的。实验指南可在下述技术手册中找到:HaloLink™ Resin 技术手册 #TM250, HaloLink™ Protein Array 技术手册 #TM310, 和HaloCHIP™ System 技术手册 #TM075。实验过程概述
HaloTag® 蛋白是一个34kDa 的突变水解酶,通过一个被固化的氯化烷配基与HaloLink™ 树脂发生共价结合。TEV 蛋白酶可从HaloLink™ 树脂上将目的蛋白切下。TEV 蛋白酶具有一个N 端HQ标签,可以使用HisLinkTM 树脂与目的蛋白分离开,这样就得到了纯化的目的蛋白。编码HaloTag® 蛋白并能够在大肠杆菌中使目的蛋白达到最优表达的最适载体是pFN18A HaloTag® T7 Flexi® Vector(G2751) 和pFN18K HaloTag® T7 Flexi® Vector (G2681)。这些载体可以单独购买。
特点    •  与His-Tag, GST 和MBP 亲和标签相比较,本系统产量大、纯度高、能够获得具有功能的可溶性蛋白:HaloLink™ 树脂以共价结合的方式捕获和固定HaloTag® 融合蛋白,特异性高。
• 在原核、哺乳动物细胞和无细胞表达系统中,目的蛋白的表达得到增强:蛋白以HaloTag® 融合蛋白的形式表达。
• 纯化表达量少的融合蛋白:HaloLink™ 树脂能快速、特异性地以共价结合的方式捕获HaloTag® 蛋白,这是一个非平衡过程。
• 使用TEV 蛋白酶剪切,可高效回收目的蛋白:TEV 蛋白酶剪切HaloTag® 蛋白和目的蛋白之间的连接肽段,其识别位点已经经过优化。由于是共价连接,HaloTag® 蛋白仍固定在树脂上。
• 节省时间:仅使用一种与下游应用兼容的缓冲液,即可支持所有的纯化步骤。
• 使用HaloTag® 荧光配基可轻松实现凝胶内检测和蛋白表达水平的定量:HaloTag® 蛋白- 配基相互作用非常稳定,可以在含有SDS 的样品缓冲液中煮沸,并直接使用SDS-PAGE 分离。

 

G6280   HaloTag Protein Purification System   品牌 Promega

HaloTag Protein Purification System

货号: G6280      产品名称: HaloTag Protein Purification System   品牌: Promega 规格: 1 each 二周到货 生化试验

说明 
 HaloTag® Protein Purification System (HaloTag®蛋白纯化系统)被设计用于纯化HaloTag® 融合蛋白,HaloTag® 是一种新型蛋白标签,能够增强重组蛋白的表达产率和可溶性。HaloTag® 技术能够将目的蛋白以共价结合的形式、高效并特异地捕获到HaloLink™ 树脂上,因此克服了其它使用亲和标签进行蛋白纯化的方法所带来的、基于平衡反应的限制因素( 例如,低水平表达蛋白的低效捕获和冲洗纯化树脂导致的蛋白流失)。

可利用HaloTag® 技术快速、方便地检测HaloTag® 融合蛋白,也可监测HaloLink™ 树脂对蛋白的固定化效率,这是通过使用HaloTag® TMR 荧光配基进行标记,然后再进行SDS-PAGE 而实现的。实验指南可在下述技术手册中找到:HaloLink™ Resin 技术手册 #TM250, HaloLink™ Protein Array 技术手册 #TM310, 和HaloCHIP™ System 技术手册 #TM075。
实验过程概述
HaloTag® 蛋白是一个34kDa 的突变水解酶,通过一个被固化的氯化烷配基与HaloLink™ 树脂发生共价结合。TEV 蛋白酶可从HaloLink™ 树脂上将目的蛋白切下。TEV 蛋白酶具有一个N 端HQ标签,可以使用HisLink™ 树脂与目的蛋白分离开,这样就得到了纯化的目的蛋白。编码HaloTag® 蛋白并能够在大肠杆菌中使目的蛋白达到最优表达的最适载体是pFN18A HaloTag® T7 Flexi® Vector(G2751) 和pFN18K HaloTag® T7 Flexi® Vector (G2681)。这些载体可以单独购买。
特点    •  与His-Tag, GST 和MBP 亲和标签相比较,本系统产量大、纯度高、能够获得具有功能的可溶性蛋白:HaloLink™ 树脂以共价结合的方式捕获和固定HaloTag® 融合蛋白,特异性高。
• 在原核、哺乳动物细胞和无细胞表达系统中,目的蛋白的表达得到增强:蛋白以HaloTag® 融合蛋白的形式表达。
• 纯化表达量少的融合蛋白:HaloLink™ 树脂能快速、特异性地以共价结合的方式捕获HaloTag® 蛋白,这是一个非平衡过程。
• 使用TEV 蛋白酶剪切,可高效回收目的蛋白:TEV 蛋白酶剪切HaloTag® 蛋白和目的蛋白之间的连接肽段,其识别位点已经经过优化。由于是共价连接,HaloTag® 蛋白仍固定在树脂上。
• 节省时间:仅使用一种与下游应用兼容的缓冲液,即可支持所有的纯化步骤。
• 使用HaloTag® 荧光配基可轻松实现凝胶内检测和蛋白表达水平的定量:HaloTag® 蛋白- 配基相互作用非常稳定,可以在含有SDS 的样品缓冲液中煮沸,并直接使用SDS-PAGE 分离。

 

G6790   HaloTag Mammalian Protein Purification System   品牌 Promega

HaloTag Mammalian Protein Purification System

货号: G6790      产品名称: HaloTag Mammalian Protein Purification System   品牌: Promega 规格: 1each 二周到货 生化试验

说明  
 HaloTag ® Mammalian Protein Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白纯化系统, Cat.# G6790 )是专为从哺乳动物细胞培养裂解液中纯化 HaloTag ® 融合蛋白而优化的试剂盒。 HaloTag ® 融合蛋白与 HaloLink™ 树脂形成高度特异的共价键,这种特异性极高的共价结合可以从培养的哺乳动物细胞中纯化并回收到纯度极高的重组蛋白,即使表达水平低时也不受影响。 HaloTag ® Mammalian Protein Detection and Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白检测和纯化系统, Cat.# G6795 )中还包括 HaloTag ® TMRDirect™ Ligand (HaloTag ® TMRDirect™ 配基)。简单易用的 HaloTag ® 融合蛋白的荧光检测方便了表达和纯化条件的快速优化。
特点    •  纯化效率高: HaloLink™ 树脂可以共价结合超过7mg/ml 的 HaloTag ® 融合蛋白,是FLAG ® 结合能力的10倍多。回收效率很高,普遍高于75% 。
•  纯度更高 : 共价捕获使得在广泛的和/或严格的洗脱过程中,不会丢失结合的蛋白,非特异结合率极低(<0.1%),蛋白纯度很高。
•  易于扩展 : 规格可向上或向下扩展,对得到mg级以上的蛋白量非常重要。
•  为哺乳动物蛋白表达而优化: HaloTag ® 平台使得用单一载体在纯化、pull-down 和细胞成像间的灵活移动成为可能。

 

G6795   HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System   品牌 Promega

HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System

货号: G6795      产品名称: HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System   品牌: Promega 规格: 1each 二周到货 生化试验

说明  
 HaloTag ® Mammalian Protein Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白纯化系统, Cat.# G6790 )是专为从哺乳动物细胞培养裂解液中纯化 HaloTag ® 融合蛋白而优化的试剂盒。 HaloTag ® 融合蛋白与 HaloLink™ 树脂形成高度特异的共价键,这种特异性极高的共价结合可以从培养的哺乳动物细胞中纯化并回收到纯度极高的重组蛋白,即使表达水平低时也不受影响。 HaloTag ® Mammalian Protein Detection and Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白检测和纯化系统, Cat.# G6795 )中还包括 HaloTag ® TMRDirect™ Ligand (HaloTag ® TMRDirect™ 配基)。简单易用的 HaloTag ® 融合蛋白的荧光检测方便了表达和纯化条件的快速优化。
特点    •  纯化效率高: HaloLink™ 树脂可以共价结合超过7mg/ml 的 HaloTag ® 融合蛋白,是FLAG ® 结合能力的10倍多。回收效率很高,普遍高于75% 。
•  纯度更高 : 共价捕获使得在广泛的和/或严格的洗脱过程中,不会丢失结合的蛋白,非特异结合率极低(<0.1%),蛋白纯度很高。
•  易于扩展 : 规格可向上或向下扩展,对得到mg级以上的蛋白量非常重要。
•  为哺乳动物蛋白表达而优化: HaloTag ® 平台使得用单一载体在纯化、 pull-down 和细胞成像间的灵活移动成为可能。

 
 

 

G6799   HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System Sample Pack   品牌 Promega

HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System Sample Pack

货号: G6799      产品名称: HaloTag Mammalian Protein Detection and Purification System Sample Pack   品牌: Promega 规格: 1each 二周到货 生化试验

说明 
 HaloTag ® Mammalian Protein Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白纯化系统, Cat.# G6790 )是专为从哺乳动物细胞培养裂解液中纯化 HaloTag ® 融合蛋白而优化的试剂盒。HaloTag ® 融合蛋白与 HaloLink™ 树脂形成高度特异的共价键,这种特异性极高的共价结合可以从培养的哺乳动物细胞中纯化并回收到纯度极高的重组蛋白,即使表达水平低时也不受影响。 HaloTag ® Mammalian Protein Detection and Purification System (HaloTag ® 哺乳动物蛋白检测和纯化系统, Cat.# G6795 )中还包括 HaloTag ® TMRDirect™ Ligand (HaloTag ® TMRDirect™ 配基)。简单易用的 HaloTag ® 融合蛋白的荧光检测方便了表达和纯化条件的快速优化。
特点    •  纯化效率高: HaloLink™ 树脂可以共价结合超过7mg/ml 的 HaloTag ® 融合蛋白,是FLAG ® 结合能力的10倍多。回收效率很高,普遍高于75% 。
•  纯度更高 : 共价捕获使得在广泛的和/或严格的洗脱过程中,不会丢失结合的蛋白,非特异结合率极低(<0.1%),蛋白纯度很高。
•  易于扩展 : 规格可向上或向下扩展,对得到mg级以上的蛋白量非常重要。
•  为哺乳动物蛋白表达而优化: HaloTag ® 平台使得用单一载体在纯化、pull-down 和细胞成像间的灵活移动成为可能。