pGloSensor-20F cAMP Plasmid
货号： E1171 产品名称： pGloSensor-20F cAMP Plasmid 品牌： Promega 规格： 20μg 二周到货 生化试验
说明 GloSensor™ cAMP Assay 采用了一种全新的方法来检测活细胞内cAMP 的水平。cAMP 是参与GPCR 信号转导的一种重要的二级信使，通过Gα-s 和Gα-i 蛋白产生作用。这个新的试剂盒基于GloSensor™ 技术，该技术将萤火虫萤光素酶经过遗传改造，插入了一个结合cAMP 的蛋白组分。当结合上cAMP 后，萤光素酶构象发生改变，导致光输出的增加。这种活细胞检测在利用cAMP 进行信号转导动力学和调控等研究方面表现出众。
将目的受体和该生物传感器在选定的细胞系中进行瞬时表达时，研究者可使用GloSensor™ cAMP 检测试剂盒进行检测。此外，还可以创造出同时被生物传感器和目的受体基因转染的稳定细胞系。操作过程很简单：用GloSensor™ cAMP Reagent (GloSensor™ cAMP试剂) 预平衡细胞大约2 小时；然后用特定的激动剂/ 拮抗剂或者未知活性的化合物处理细胞，10-30 分钟后检测发光。无需其它加样步骤或者操作过程。大部分带有自动进样器的常用发光检测仪都能检测，比如GloMax® 系列发光检测仪。GloSensor™ cAMP 试剂要求在GloSensor™ Limited Use Label License (GloSensor™ 有限使用标签许可证书) 指导下使用。
选择合适的质粒：
我们提供了生物传感器的两种变体。在多数实验中，我们建议首选 pGloSensor™ -22F cAMP 质粒。
pGloSensor™ -22F cAMP 质粒：与pGloSensor™ -20F cAMP质粒相比，用该质粒进行体外无细胞表达得到的生物传感器，在cAMP 饱和时活化EC50 及信噪比得到增强。而在活细胞中，这两种质粒表现出的性能基本类似。
pGloSensor™-20F cAMP 质粒：该质粒编码的生物传感器可在37℃下的HEK293 细胞中表现出良好的性能；而pGloSensor™ -22F cAMP 质粒所发出的萤光在生理温度下更难检测。
关于这两种质粒基本性能差异的更深入解释，请参阅Technical Manual (#TM076) 的第3.B 节——GloSensor™ 质粒的选择建议。
特点 • 同类产品中性能最佳：高Z` 值及高信号；背景比值非常适用于HTS/uHTS；高达1,000 倍的光输出变化。
• 无需裂解的活细胞检测模式：“0 步骤检测”极大地方便了HTS/uHTS；对活细胞内的cAMP 的方便监测为受体生物学提供了更为完整的分析手段。
• 高灵敏度及增加的生物相关性：方便检测低丰度内源受体；直接检测Gi- 偶联受体的活性及在未加入毛喉萜(forskolin) 时反相激动剂的活性。无需加入PDE 抑制剂。
G9461 pGloSensor-10F Linear Vector 品牌 Promega
pGloSensor-10F Linear Vector
货号： G9461 产品名称： pGloSensor-10F Linear Vector 品牌： Promega 规格： 20μl 二周到货 生化试验
说明
Protease-Glo™ Assay (Protease-Glo™ 检测试剂盒) 是一种检测蛋白酶活性的新方法，该试剂盒采用一种经基因工程改造过的萤火虫(Photinus pyralis ) 萤光素酶，是GloSensor™ 平台技术的一个代表。该试剂盒使用一种环状序列突变的萤火虫萤光素酶，即GloSensor™ -10F 蛋白，该分子上带有蛋白酶的识别位点，可作为蛋白酶底物。使用该检测系统时，可通过分子克隆和偶联的转录/ 翻译无细胞表达系统快速产生蛋白酶底物，从而很容易对蛋白酶功能作出评估。实验时，需设计出对蛋白酶识别序列进行编码的寡核苷酸，并将其克隆至GloSensor™ -10F 基因上，后者位于线性载体上。然后，将包含目的蛋白酶位点的GloSensor™ 蛋白在无细胞表达系统中合成出来，随后作为蛋白酶底物使用。蛋白酶识别序列被剪切后，激活了GloSensor™ 蛋白，并产生发光。发光水平与蛋白酶活性具有相关性。Protease-Glo™检测试剂盒具有生物发光检测的优势：定量简单、灵敏度高，动态范围宽。
特点 . 灵活性：可与要求P` 值的蛋白酶一同使用。
• 避免了荧光产生的背景问题：化学发光的物理和化学特性克服了荧光干扰所导致的问题。
• 灵敏度更高：发光容易实现，动态范围宽。
• 开放的平台系统：可创建您自己的蛋白酶识别底物。
• 可进行目的序列的评估：本系统是确定最佳蛋白酶识别序列或氨基酸置换效果的优秀工具。